藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則用于指導(dǎo)藥品微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì) 量控制。涉及生物安全的操作，應(yīng)符合相應(yīng)國家、行業(yè)、地方的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定等。

        藥品微生物的檢驗(yàn)結(jié)果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗(yàn)方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗(yàn)中，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，必須使用經(jīng)驗(yàn)證的檢測方法并嚴(yán)格按照藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則要求進(jìn)行檢驗(yàn)。

        藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則包括以下幾個方面:人員、培養(yǎng)基、 試劑、菌種、設(shè)施和環(huán)境條件、設(shè)備、樣品、檢驗(yàn)方法、污染廢棄物處理、結(jié)果有效性的保證、實(shí)驗(yàn)記錄、結(jié)果的判斷和檢測報(bào)告、文件等。

人員

        微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置質(zhì)量負(fù)責(zé)人、技術(shù)管理者、檢驗(yàn)人員、生物安全責(zé)任 人、生物安全監(jiān)督員、菌種管理員及相關(guān)設(shè)備和材料管理員等崗位，可通過一 人多崗設(shè)置。

        從事藥品微生物試驗(yàn)工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。

        檢驗(yàn)人員必須熟悉相關(guān)檢測方法、程序、檢測目的和結(jié)果評價。微生物實(shí) 驗(yàn)室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符，如:管理技能、 實(shí)驗(yàn)室安全、試驗(yàn)安排、預(yù)算、實(shí)驗(yàn)研究、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、 技術(shù)報(bào)告書寫等。

        實(shí)驗(yàn)人員上崗前應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)他們可以承擔(dān)某一試驗(yàn)前，他們不能獨(dú)立從事該項(xiàng)微生物試驗(yàn)。培訓(xùn)內(nèi)容包括勝任工作所必需的設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技術(shù)等方面的培訓(xùn)，如無菌操作、培養(yǎng)基制備、消毒、滅菌、注平板、菌落計(jì)數(shù)、菌種的轉(zhuǎn)種、傳代和保藏、潔凈區(qū)域的微生物監(jiān)測、微生物檢查方法和鑒定基本技術(shù)等，經(jīng)考核合格后方可上崗。 

        實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室生物安全方面的培訓(xùn)，熟悉生物安全操作知識和消毒滅菌知識，保證自身安全，防止微生物在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部污染。

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定實(shí)驗(yàn)人員持續(xù)培訓(xùn)的需求，制定繼續(xù) 教育計(jì)劃，保證知識與技能不斷的更新。

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定人員具備承擔(dān)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室活動的能力，以及評估偏離影響程 度的能力。可通過參加內(nèi)部質(zhì)量控制、能力驗(yàn)證或?qū)嶒?yàn) 室間比對等方式客觀評估檢驗(yàn)人員的能力，并授權(quán)從事相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室活動， 必要時對其進(jìn)行再培訓(xùn)并重新評估。當(dāng)使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術(shù)時， 有必要在檢測前確認(rèn)微生物檢測人員的操作技能。

        所有人員的培訓(xùn)、考核內(nèi)容和結(jié)果均應(yīng)記錄歸檔。

培養(yǎng)基

        培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。

        微生物實(shí)驗(yàn)室使用的培養(yǎng)基可按培養(yǎng)基處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基配制，或直接采用商品化的預(yù)制培養(yǎng)基。

        商品化的脫水培養(yǎng)基或預(yù)制培養(yǎng)基應(yīng)設(shè)立接收標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)行符合性驗(yàn) 收:包括品名、批號、數(shù)量、生產(chǎn)單位、外觀性狀(瓶蓋密封度、內(nèi)容物有無 結(jié)塊霉變等)、處方和使用說明、有效期、貯藏條件、生產(chǎn)商提供的質(zhì)控報(bào)告 和/或其他相關(guān)材料(如配方變更)。

        培養(yǎng)基的配制

        制備培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇質(zhì)量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分 進(jìn)行配制。不應(yīng)使用結(jié)塊、顏色發(fā)生變化或其他物理性狀明顯改變的脫水培養(yǎng)基。 

        脫水培養(yǎng)基或單獨(dú)配方組分應(yīng)在適當(dāng)?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光， 所有的容器應(yīng)密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。

        為保證培養(yǎng)基質(zhì)量的穩(wěn)定可靠并符合要求，配制時，脫水培養(yǎng)基應(yīng)按 使用說明上的要求操作，自制培養(yǎng)基應(yīng)按配方準(zhǔn)確配制。各脫水培養(yǎng)基或各配方組分稱量應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的精確度。配制培養(yǎng)基最常用的 溶劑是純化水。應(yīng)記錄各稱量物的重量和水的使用量。

        配制培養(yǎng)基所用容器不得影響培養(yǎng)基質(zhì)量，一般為玻璃容器。培養(yǎng)基配制 所用的容器和配套器具應(yīng)潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來 物質(zhì)的殘留。對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應(yīng)預(yù)先進(jìn)行滅 菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

        配制時，培養(yǎng)基應(yīng)完全溶解混勻，再行分裝與滅菌。若需要加熱助溶，應(yīng)注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其 他組分時，加入后應(yīng)充分混勻。

        滅菌

        培養(yǎng)基應(yīng)采用經(jīng)驗(yàn)證的滅菌程序滅菌。商品化的預(yù)制培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術(shù)，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌等技術(shù)。

        培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降 低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌,培養(yǎng) 基滅菌方法和條件，可通過無菌性試驗(yàn)和促生長試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，對高 壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分 布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞 絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方 式也將影響加熱的速度。

        應(yīng)確定每批培養(yǎng)基滅菌后的 pH 值(冷卻至 25°C測定)。若培養(yǎng)基處方 中未列出 pH 值的范圍，除非經(jīng)驗(yàn)證表明培養(yǎng)基的 pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH 值的范圍不能超過規(guī)定值±0.2。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，應(yīng)使用滅菌 或除菌的溶液。

        培養(yǎng)基的貯藏

        自配的培養(yǎng)基應(yīng)標(biāo)記名稱、批號、配制日期、制備人等信息，并在已驗(yàn)證 的條件下貯藏。商品化的預(yù)制培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要 求進(jìn)行貯藏，所采用的貯藏和運(yùn)輸條件應(yīng)使成品培養(yǎng)基最低限度的失去水分并提供機(jī)械保護(hù)。

        培養(yǎng)基滅菌后不得貯藏在高壓滅菌器中，瓊脂培養(yǎng)基不得在 0°C或 0°C以下 存放，因?yàn)槔鋬隹赡芷茐哪z特性。培養(yǎng)基保存應(yīng)防止水分流失，避光保存。 瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過 1 周，且應(yīng)密閉包裝，若 延長保存期限，保存期需經(jīng)驗(yàn)證確定。

        培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗(yàn)

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定試驗(yàn)用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制程序，確保所用培養(yǎng)基質(zhì)量符合相關(guān)檢查的需要。

        實(shí)驗(yàn)室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量依賴于其制備過程，采用不適宜方 法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

        所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)室配制的培養(yǎng)基的常規(guī) 監(jiān)控項(xiàng)目是 pH 值、適用性檢查試驗(yàn)，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基 在有效期內(nèi)應(yīng)依據(jù)適用性檢查試驗(yàn)確定培養(yǎng)基質(zhì)量是否符合要求。有效期的長短取決于在一定存放條件下(包括容器特性及密封性)的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

        除藥典附錄另有規(guī)定外，在實(shí)驗(yàn)室中，若采用已驗(yàn)證的配制和滅菌程序制 備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)行 1 次。 如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗(yàn)證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進(jìn)行適用性檢查 試驗(yàn)。試驗(yàn)的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關(guān)附錄中進(jìn)行選擇，也可增加生產(chǎn) 環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。

        培養(yǎng)基的質(zhì)量控制試驗(yàn)若不符合規(guī)定，應(yīng)尋找不合格的原因，以防止問題重復(fù)出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

        固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許 1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質(zhì)量 下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱，若采用其 它溶解方法，應(yīng)對其進(jìn)行評估，確認(rèn)該溶解方法不影響培養(yǎng)基質(zhì)量。融化的培 養(yǎng)基應(yīng)置于 45~50°C的環(huán)境中，不得超過 8 小時。使用過的培養(yǎng)基(包括失效 的培養(yǎng)基)應(yīng)按照國家污染廢物處理相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。

        制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行下列檢查:容器和蓋子不得破裂，裝量應(yīng)相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結(jié)晶，不得污染微生物等。

        用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護(hù)，以防止外來的 污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有文件規(guī)定微生物實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基、原材料及補(bǔ)充添加物的采購、 驗(yàn)收、貯藏、制備、滅菌、質(zhì)量檢查與使用的全過程， 并對培養(yǎng)基的驗(yàn)收、制備、滅菌(包括滅菌后貯藏)、和貯藏、質(zhì)量控制試驗(yàn) 和使用情況等進(jìn)行記錄。包括培養(yǎng)基名稱，培養(yǎng)基表觀特性，配制日期和配制 人員的標(biāo)識，培養(yǎng)基/溶液的類型、體積，分裝的體積和滅菌后的體積(作為 稀釋液或其他原因要對體積進(jìn)行控制)，成分名稱、每個成分物質(zhì)的含量、制 造商、批號、稱量，pH值，滅菌措施包括方式、設(shè)備、時間和溫度等。

 試劑

        微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有試劑接收、檢查和貯藏的程序，以確保所用試劑質(zhì)量符合相關(guān)檢查要求。

        實(shí)驗(yàn)用關(guān)鍵試劑，在使用和貯藏過程中，應(yīng)對每批試劑的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對試劑進(jìn)行管理控制，保存和記錄相關(guān)資料。

        實(shí)驗(yàn)室配制的所有試劑、試液及溶液應(yīng)貼好標(biāo)簽，標(biāo)明名稱、制備 依據(jù)、適用性、濃度、貯藏條件、制備日期、有效期及制備人等信息。

菌種

        試驗(yàn)過程中，生物樣本可能是最敏感的，因?yàn)樗鼈兊幕钚院吞匦砸蕾囉诤?/span>適的試驗(yàn)操作和貯藏條件。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。

        藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)為有明確來源來的標(biāo)準(zhǔn)菌株，或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的可以溯源的商業(yè)派生菌株。

        標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)，的其復(fù)蘇、復(fù)壯或培養(yǎng) 物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行。從國內(nèi)或國外菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)過復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株保存時， 可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷 凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍(低于-30°C)等方法保存。低于-70°C或低溫 冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每 周 1 次轉(zhuǎn)種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

        工作菌株的傳代次數(shù)應(yīng)嚴(yán)格控制，不得超過 5 代(從菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株為第 0 代)，以防止過度的傳代增加菌種變異的風(fēng)險(xiǎn)。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何形式的轉(zhuǎn)種均被認(rèn)為是傳代 1 次。必要時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對工作菌株的特性和純度進(jìn)行確認(rèn)。

        工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。標(biāo)準(zhǔn)菌株如果經(jīng)過確認(rèn)試驗(yàn)證明已經(jīng)老化、退化、變異、污染等或該菌株已無使用需要時，應(yīng)及時滅菌銷毀。

        菌種必須定期轉(zhuǎn)種傳代，并做純度、特性等實(shí)驗(yàn)室所需關(guān)鍵指標(biāo)的確認(rèn)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立菌種管理(從標(biāo)準(zhǔn)菌株到工作菌株)的文件和記錄，內(nèi)容包括菌株的申購、進(jìn) 出、收集、貯藏、確認(rèn)、轉(zhuǎn)種、使用以及銷毀等全過程。每支菌種都應(yīng)注明其 名稱、標(biāo)準(zhǔn)號、接種日期、傳代數(shù)，并記錄菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件、 菌種保藏的位置和條件等信息。

設(shè)施和環(huán)境條件 

        微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有進(jìn)行微生物檢測所需的適宜、充分的設(shè)施條件，實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保證不影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專用，并與生產(chǎn)、辦公等其他區(qū)域分開。

        實(shí)驗(yàn)室的布局和運(yùn)行 

        微生物實(shí)驗(yàn)室的布局與設(shè)計(jì)應(yīng)充分考慮到試驗(yàn)設(shè)備安裝、良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的要求。以能獲得可靠的檢測結(jié)果為重要依據(jù)，且符 合所開展微生物檢測活動生物安全等級的需要。實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)的基本原則是 既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗(yàn)過程對人員和環(huán)境造成危害， 同時還應(yīng)考慮活動區(qū)域的合理規(guī)劃及區(qū)分，避免混亂和污染，提高微生物實(shí)驗(yàn)室操作的可靠性。

        微生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)和建筑材料應(yīng)考慮其適用性，以利清潔、消毒、滅菌 并減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。潔凈區(qū)域應(yīng)配備獨(dú)立的空氣機(jī)組或空氣凈化系統(tǒng)， 以滿足相應(yīng)的檢驗(yàn)要求，包括溫度和濕度的控制，壓力、照度和噪聲等都應(yīng)符 合工作要求。空氣過濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)和更換, 并保存相關(guān)記錄。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)包括相應(yīng)的潔凈區(qū)域和生物安全控制區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)實(shí) 驗(yàn)?zāi)康模跁r間或空間上有效分隔不相容的實(shí)驗(yàn)活動，將交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)降到最低。生物安全控制區(qū)域應(yīng)配備滿足要求的生物安全柜，以避免有危害性的生物因子對實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境造成危害。霉菌試驗(yàn)要有適當(dāng)?shù)拇胧?/span>防止孢子污染環(huán)境。對人或環(huán)境有危害的樣品應(yīng)采取相應(yīng)的隔離防護(hù)措施。一般情況下，藥品微生物檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有符合無菌檢查法(通則1101)和微生 物限度檢查(通則1105、通則1106)要求的、用于開展無菌檢查和微生物限 度檢查    及無菌采樣等檢測活動的、獨(dú)立設(shè)置的潔凈室(區(qū))或隔離系統(tǒng)，并配備相應(yīng)的陽性菌實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室、試驗(yàn)結(jié)果觀察區(qū)、培養(yǎng)基及實(shí)驗(yàn)用具準(zhǔn)備(包括滅菌)區(qū)、樣品接收和貯藏室(區(qū))、標(biāo)準(zhǔn)菌株貯藏室(區(qū))、污染物處理區(qū)和文檔處理區(qū)等。微生物基因擴(kuò)增檢測實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)設(shè)分隔開 的工作區(qū)域以防止污染，包括(但不限于)試劑配制與貯存區(qū)、核酸提取區(qū)、 核酸擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。應(yīng)對上述區(qū)域明確標(biāo)識。

        微生物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進(jìn)行，以降低交叉污染、假陽性結(jié) 果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。無菌檢查應(yīng)在 B 級背景下的 A 級單向流潔凈區(qū)域 或隔離器系統(tǒng)中進(jìn)行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于 D 級背景下的 B 級單向流空 氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。 A 級和 B 級區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器 (HEPA)。

        一些樣品若需要證明微生物的生長或進(jìn)一步分析培養(yǎng)物的特性，應(yīng)在生物安全控制區(qū)域進(jìn)行。任何出現(xiàn)微生物生長的培養(yǎng)物不得在實(shí)驗(yàn)室潔凈區(qū)域內(nèi)打開。對染菌的樣品及培養(yǎng)物應(yīng)有效隔離，以減少假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。病原微生物的分離鑒定工作應(yīng)在相應(yīng)級別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

         實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定進(jìn)出潔凈區(qū)域的人和物的控制程序和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的工作(如潔凈度驗(yàn)證及監(jiān)測、消毒、清潔維護(hù)等)或涉及生物安全 的設(shè)施和環(huán)境條件的技術(shù)要求能夠有效地控制、監(jiān)測并記錄，當(dāng)條件滿足檢測 方法要求方可進(jìn)行樣品檢測工作。微生物實(shí)驗(yàn)室使用權(quán)限應(yīng)限于經(jīng)授權(quán)的工作人 員，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)了解潔凈區(qū)域的正確進(jìn)出的程序，包括更衣流程;該潔凈區(qū)域的 預(yù)期用途、使用時的限制及限制原因;適當(dāng)?shù)臐崈艏墑e。

        環(huán)境監(jiān)測 

        微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)制定完整的潔凈室(區(qū))和隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證和環(huán)境監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，環(huán)境監(jiān)測項(xiàng)目和監(jiān)測頻率及對超標(biāo)結(jié)果的處理應(yīng)有書面程序。監(jiān)測項(xiàng)目應(yīng)涵蓋到位，包括對空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)(溫度、相對濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等)的有效控制和監(jiān)測。環(huán)境監(jiān)測按藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則(通則 9205)進(jìn)行。

        清潔、消毒和衛(wèi)生 微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有制定清潔、消毒和衛(wèi)生的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，規(guī)程中應(yīng)涉及環(huán)境監(jiān)測結(jié)果。 

        實(shí)驗(yàn)室在使用前和使用后應(yīng)進(jìn)行消毒，并定期監(jiān)測消毒效果，要有足夠洗手和手消毒設(shè)施。應(yīng)有對有害微生物發(fā)生污染的處理規(guī)程。 所用的消毒劑種類應(yīng)滿足潔凈實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求并定期更換。理想的消毒劑既能 殺死廣泛的微生物、對人體無毒害、不會腐蝕或污染設(shè)備，又應(yīng)有清潔劑的作 用、性能穩(wěn)定、作用快、殘留少、價格合理。所用消毒劑和清潔劑的微生物污 染狀況應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測，并在規(guī)定的有效期內(nèi)使用，A 級和 B 級潔凈區(qū)應(yīng)當(dāng)使用無 菌的或經(jīng)無菌處理的消毒劑和清潔劑。

設(shè)備

        微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備與檢驗(yàn)?zāi)芰凸ぷ髁肯噙m應(yīng)的儀器設(shè)備，其類型、測量范圍和準(zhǔn)確度等級應(yīng)滿足檢驗(yàn)所采用標(biāo)準(zhǔn)的要求。設(shè)備的安裝和布局應(yīng)便于操作，易于維護(hù)、清潔和校準(zhǔn)，并保持清潔和良好的工作狀態(tài)。用于試驗(yàn)的每臺儀器、設(shè)備應(yīng)該有唯一標(biāo)識。

        儀器設(shè)備應(yīng)有合格證書，實(shí)驗(yàn)室在儀器設(shè)備完成相應(yīng)的檢定、校準(zhǔn)、驗(yàn)證、 確認(rèn)其性能，并形成相應(yīng)的操作、維護(hù)和保養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程后方可正式使用， 儀器設(shè)備使用和日常監(jiān)控要有記錄。

        設(shè)備的維護(hù) 

        為保證儀器設(shè)備處于良好工作狀態(tài)，應(yīng)定期對其進(jìn)行維護(hù)和性能驗(yàn)證，并保存相關(guān)記錄。儀器設(shè)備若脫離實(shí)驗(yàn)室或被檢修，恢復(fù)使用前應(yīng)重新確認(rèn)其性能符合要求。

        重要的儀器設(shè)備，如培養(yǎng)箱、冰箱等，應(yīng)由專人負(fù)責(zé)進(jìn)行維護(hù)和保管，保證其運(yùn)行狀態(tài)正常和受控，同時應(yīng)有相應(yīng)的備用設(shè)備以保證試驗(yàn)菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性，高壓滅菌器、隔離器、生物安全柜等設(shè)備實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)培訓(xùn)后持證上崗。對于培養(yǎng)箱、冰箱、高壓滅菌鍋等影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵設(shè)備應(yīng)在其運(yùn)行過程中對關(guān)鍵參數(shù)(如溫度、壓力)進(jìn)行連續(xù)觀測和記錄， 有條件的情況下盡量使用自動記錄裝置。如果發(fā)生偏差，應(yīng)評估對以前的檢測 結(jié)果造成的影響并采取必要的糾正措施。

        對于一些容易污染微生物的儀器設(shè)備如水浴鍋、培養(yǎng)箱、冰箱和生物安全柜等應(yīng)定期進(jìn)行清潔和消毒。

        對試驗(yàn)需用的無菌器具應(yīng)實(shí)施正確的清洗、滅菌措施，并形成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，無菌器具應(yīng)有明確標(biāo)識并與非無菌器具加以區(qū)別。

        實(shí)驗(yàn)室的某些設(shè)備(例如培養(yǎng)箱、高壓滅菌器和玻璃器皿等) 應(yīng)專用，除 非有特定預(yù)防措施，以防止交叉污染。

        校準(zhǔn)、性能驗(yàn)證和使用監(jiān)測 

        微生物實(shí)驗(yàn)室所用的儀器應(yīng)根據(jù)日常使用的情況進(jìn)行定期的校準(zhǔn)，并記錄。校準(zhǔn)的周期和校驗(yàn)的內(nèi)容根據(jù)儀器的類型和設(shè)備在實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的數(shù)據(jù)的重要性 不同而不同。儀器上應(yīng)有標(biāo)簽說明校準(zhǔn)日期和再校準(zhǔn)日期。

        (1)溫度測量裝置

        溫度不但對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有直接的影響，而且還對儀器設(shè)備的正常運(yùn)轉(zhuǎn)和正確 操作起關(guān)鍵作用。相關(guān)的溫度測量裝置如培養(yǎng)箱和高壓滅菌器中的溫度計(jì)、 熱電耦和鉑電阻溫度計(jì)，應(yīng)具有可靠的質(zhì)量并進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保所需的精確度， 溫度設(shè)備的校準(zhǔn)應(yīng)遵循國家或國際標(biāo)準(zhǔn)。

        溫度測量裝置可以用來監(jiān)控冰箱、超低溫冰箱、培養(yǎng)箱、水浴鍋等設(shè)備的溫度，應(yīng)在使用前驗(yàn)證此類裝置的性能。

        (2)滅菌設(shè)備

        滅菌設(shè)備的滅菌效果應(yīng)滿足使用要求。應(yīng)使用多種傳感器(如:溫度、壓 力等)監(jiān)控滅菌過程。對實(shí)際應(yīng)用的循環(huán)條件和裝載狀態(tài)需定期進(jìn) 行性能驗(yàn)證，經(jīng)過維修或工藝變化等可能對滅菌效果產(chǎn)生影響時，應(yīng)重新驗(yàn)證。 應(yīng)定期使用生物指示劑檢查滅菌設(shè)備的效果并記錄，指示劑應(yīng)放在不易達(dá)到滅 菌的部位。日常監(jiān)控可以采用物理或化學(xué)方式進(jìn)行。 非簡單壓力容器操作人員需持有特種作業(yè)人員證書。

        (3)生物安全柜、層流超凈工作臺、高效過濾器

        應(yīng)由有專業(yè)技能的人員進(jìn)行生物安全柜、層流超凈工作臺及高效過濾器的安裝與更換，要按照確認(rèn)的方法進(jìn)行現(xiàn)場生物和物理的檢測，并定期進(jìn)行再驗(yàn)證。

        實(shí)驗(yàn)室生物安全柜和層流超凈工作臺的通風(fēng)應(yīng)符合微生物風(fēng)險(xiǎn)級別及符合安全要求。應(yīng)定期對生物安全柜、層流超凈工作臺進(jìn)行監(jiān)測，以確保其性能符合相關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存檢查記錄和性能測試結(jié)果。

        (4)其他設(shè)備

        懸浮粒子計(jì)數(shù)器、浮游菌采樣器應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn); pH 計(jì)、天平和其它類似儀器的性能應(yīng)定期或在每次使用前確認(rèn);若濕度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影 響，濕度計(jì)應(yīng)按國家或國際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行校準(zhǔn);當(dāng)所測定的時間對檢測結(jié)果有影響 時，應(yīng)使用校準(zhǔn)過的計(jì)時儀或定時器;使用離心機(jī)時，應(yīng)評估離心機(jī)每分鐘的 轉(zhuǎn)數(shù)，若離心是關(guān)鍵因素，離心機(jī)應(yīng)該進(jìn)行校準(zhǔn)。

樣品

        樣品采集

        試驗(yàn)樣品的采集，應(yīng)遵循隨機(jī)抽樣的原則，由經(jīng)過培訓(xùn)的人員在受控條件下進(jìn)行。如需無菌抽樣，應(yīng)采用無菌操作技術(shù)，并在具有無菌條件的特定區(qū)域中進(jìn)行，防止 樣品受到微生物污染而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。抽樣的任何消毒過程(如抽樣點(diǎn)的 消毒)不能影響樣品中微生物的檢出。抽樣環(huán)境應(yīng)監(jiān)測并記錄，同時還需記錄采樣時間。

        抽樣容器應(yīng)貼有唯一性的所抽樣品應(yīng)有清晰標(biāo)識，避免樣品混淆和誤用。 標(biāo)識應(yīng)包括注明樣品名稱、批號、抽樣日期、采樣容器、抽樣人等信息，使標(biāo) 識安全可見并可追溯。抽樣應(yīng)由經(jīng)過培訓(xùn)的人員使用無菌設(shè)備在無菌條件下進(jìn) 行無菌操作。抽樣環(huán)境應(yīng)監(jiān)測并記錄，同時還需記錄采樣時間。

        樣品儲存和運(yùn)輸

        待檢樣品應(yīng)在合適的條件下貯藏并保證其完整性，盡量減少污染的微生物發(fā)生變化。樣品在運(yùn)輸過程中，應(yīng)保持原有(規(guī)定)的儲存條件或采取必要的 措施(如冷藏或冷凍)。應(yīng)明確規(guī)定和記錄樣品的貯藏和運(yùn)輸條件。

        樣品的確認(rèn)和處理

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有被檢樣品的傳遞、接收、儲存和識別管理程序。 

        實(shí)驗(yàn)室在收到樣品后應(yīng)根據(jù)有關(guān)規(guī)定盡快對樣品進(jìn)行檢查，并記錄被檢樣品所有相關(guān)信息，如:接收日期及時間、接收時樣品的狀況、采樣操作的特征 (包括采樣日期和采樣條件等)、貯藏條件。

        如果樣品存在數(shù)量不足、包裝破損、標(biāo)簽缺失、溫度不適等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在決定是否檢測或拒絕接受樣品之前與相關(guān)人員溝通。樣品的包裝和標(biāo)簽有可能被嚴(yán)重污染，因此搬運(yùn)和儲存樣品時應(yīng)小心以避免污染的擴(kuò)散，容器外部的消毒應(yīng)不影響樣品的完整性。樣品的任何異常狀況在檢驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)有說明。

        選擇具有代表性的樣品，根據(jù)有關(guān)的國家或國際標(biāo)準(zhǔn)，或者使用經(jīng)驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)方法，盡快進(jìn)行檢驗(yàn)。

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照書面管理程序?qū)悠愤M(jìn)行保留和處置。已知被 污染的樣品應(yīng)經(jīng)過無害化處理。

檢驗(yàn)方法

        檢驗(yàn)方法選擇

        藥品微生物檢驗(yàn)時，應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇適宜的方法進(jìn)行樣品檢驗(yàn)。

        檢驗(yàn)方法的適用性確認(rèn)

        藥典方法或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法是經(jīng)過驗(yàn)證的，在引入檢測之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些方法。樣品檢驗(yàn)時所采用的方法應(yīng)經(jīng)適用性 確認(rèn)。當(dāng)發(fā)布機(jī)構(gòu)修訂了標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)在所需的程度上重新進(jìn)行方法適用性確認(rèn)。

        實(shí)驗(yàn)室對所用商業(yè)檢測系統(tǒng)如試劑盒等應(yīng)保留確認(rèn)數(shù)據(jù)，這些確認(rèn)數(shù)據(jù)可由制造者提供或由第三方機(jī)構(gòu)評估，必要時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對商業(yè)檢測系統(tǒng)進(jìn)行確認(rèn)。

        檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證

       如果檢驗(yàn)方法不是標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，使用前應(yīng)進(jìn)行替代方法的驗(yàn) 證，確認(rèn)其應(yīng)用效果優(yōu)于或等同于標(biāo)準(zhǔn)方法。替代方法的驗(yàn)證按藥品微生物 檢驗(yàn)替代方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則(通則9201)進(jìn)行。

污染廢棄物處理

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有妥善處理廢棄樣品、過期(或失效)培養(yǎng)基和有害廢棄物的設(shè)施和制度，旨在減少檢查環(huán)境和材料的污染。污染廢棄物管理應(yīng)符合國家和地方法規(guī)的要求，并應(yīng)交由當(dāng)?shù)丨h(huán)保部門 資質(zhì)認(rèn)定的單位進(jìn)行最終處置，由專人負(fù)責(zé)并書面記錄和存檔。

        藥品微 生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)制定針對所操作微生物危害的安全應(yīng)急預(yù)案，規(guī)范生物安全事 故發(fā)生時的操作流程和方法，避免和減少緊急事件對人員、設(shè)備和工作的傷害 和影響。如:活的培養(yǎng)物灑出必須就地處理，不得使培養(yǎng)物污染擴(kuò)散。實(shí)驗(yàn)室 還應(yīng)配備消毒劑、化學(xué)和生物學(xué)的溢出處理盒等相關(guān)裝備。

        檢測結(jié)果有效性的保證 

        內(nèi)部質(zhì)量控制

        為評估實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的持續(xù)有效，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂質(zhì) 量控制程序和計(jì)劃，對內(nèi)部質(zhì)量控制活動的實(shí)施內(nèi)容、方式、責(zé)任人及結(jié)果評 價依據(jù)作出明確的規(guī)定。質(zhì)量控制計(jì)劃應(yīng)盡可能覆蓋實(shí)驗(yàn)室的所有檢測人員和 檢測項(xiàng)目。

        對于藥品微生物檢測項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)室可定期使用標(biāo)準(zhǔn)樣品(如需氧菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)樣品等)、質(zhì)控樣品或用標(biāo)準(zhǔn)菌株人工污染的樣品等開展內(nèi)部質(zhì)量控制，并根據(jù)工作量、人員水平、能力驗(yàn)證結(jié)果、外部評審等情況明確規(guī)定質(zhì)控頻次。

        在實(shí)施人員比對、設(shè)備比對和方法比對時，要選取均勻性和穩(wěn)定性符合要求的樣品進(jìn)行。

        外部質(zhì)量評估 

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加與檢測范圍相關(guān)的國家能力驗(yàn)證或?qū)嶒?yàn)室之間的比對實(shí)驗(yàn)來評估檢測能力水平，通過參加外部質(zhì)量評估來評定檢測結(jié)果的偏差。

        實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對評估結(jié)果進(jìn)行分析，適時改進(jìn)。

實(shí)驗(yàn)記錄

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性依賴于試驗(yàn)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，而標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)指出如何進(jìn)行正確的試驗(yàn)操作。為保證數(shù)據(jù)完整性，實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包含所有關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，確保可重復(fù)該實(shí)驗(yàn)室活動。

        實(shí)驗(yàn)原始記錄至少應(yīng)包括以下內(nèi)容:實(shí)驗(yàn)日期、檢品名稱、實(shí)驗(yàn)人員姓名、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編號或方法、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、偏差(存在時)、實(shí)驗(yàn)參數(shù)(所使用的設(shè)備、菌種、培養(yǎng)基和批號以及培養(yǎng)溫度等)、主管/復(fù)核人簽名。

        實(shí)驗(yàn)記錄上還應(yīng)顯示出檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的選擇, 如果使用的是藥典標(biāo)準(zhǔn)，必須保證 是現(xiàn)行有效的標(biāo)準(zhǔn)。

        試驗(yàn)所用的每一個關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)設(shè)備均應(yīng)有記錄，設(shè)備日志或表格應(yīng)設(shè)計(jì)合理，以滿足試驗(yàn)記錄的追蹤性，設(shè)備溫度(水浴、培養(yǎng)箱、滅菌器)必須記錄， 且具有追溯性。

        實(shí)驗(yàn)記錄可以是紙質(zhì)的，也可以是電子的。實(shí)驗(yàn)記錄的修改應(yīng)可追溯到前一個版本，并能保存原始及修改后的數(shù)據(jù)和文檔，包括修改日期、修改內(nèi)容和修改人員。

        歸檔的數(shù)據(jù)應(yīng)確保安全。電子數(shù)據(jù)應(yīng)定期備份，其備份及恢復(fù)流程必須經(jīng) 過驗(yàn)證。紙質(zhì)數(shù)據(jù)應(yīng)便于查閱。數(shù)據(jù)的保存期限應(yīng)滿足相應(yīng)規(guī)范要求，并建立 數(shù)據(jù)銷毀規(guī)程，數(shù)據(jù)的銷毀應(yīng)經(jīng)過審批。

結(jié)果的判斷和檢測報(bào)告

        由于微生物試驗(yàn)的特殊性，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析時，對結(jié)果應(yīng)進(jìn)行充分和全面 的評價，所有影響結(jié)果觀察的微生物條件和因素應(yīng)完全考慮，包括與規(guī)定的限 度或標(biāo)準(zhǔn)有很大偏差的結(jié)果;微生物在原料、輔料或試驗(yàn)環(huán)境中存活的可能性; 及微生物的生長特性等。特別要了解實(shí)驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的差別是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 若發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合藥典各品種項(xiàng)下要求或另外建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)進(jìn)行原 因調(diào)查。引起微生物污染結(jié)果不符合標(biāo)準(zhǔn)的原因主要有兩個:試驗(yàn)操作錯誤或 產(chǎn)生無效結(jié)果的試驗(yàn)條件;產(chǎn)品本身的微生物污染總數(shù)超過規(guī)定的限度或檢出控制菌。

        異常結(jié)果出現(xiàn)時，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。調(diào)查時應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、抽樣區(qū)的防護(hù)條件、樣品在該檢驗(yàn)條件下以往檢驗(yàn)的情況、樣品本身具有使微生物存活或繁殖的特性等情況。此外，回顧試驗(yàn)過程，也可評價該實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及實(shí)驗(yàn)過程是否恰當(dāng)。如果試驗(yàn)操作被確認(rèn)是引起實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符合的原因，那么應(yīng)制定糾正和預(yù)防措施，按照正確的操作方案進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在這種情況下，對試驗(yàn)過程及試驗(yàn)操作應(yīng)特別認(rèn)真地進(jìn)行監(jiān)控。 

        樣品檢驗(yàn)應(yīng)有重試的程序，如果依據(jù)分析調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)有錯誤而判實(shí)驗(yàn)結(jié)果無效，應(yīng)進(jìn)行重試。如果需要，可按相關(guān)規(guī)定重新抽樣，但抽樣方法不能影響不符合規(guī)定結(jié)果的分析 調(diào)查。上述情況應(yīng)保留相關(guān)記錄。

        微生物實(shí)驗(yàn)室檢測報(bào)告應(yīng)該符合檢測方法的要求。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)準(zhǔn)確、清晰、明確和客觀地報(bào)告每一項(xiàng)或每一份檢測的結(jié)果。

        檢測報(bào)告的信息應(yīng)該完整、可靠。

        檢驗(yàn)過程出現(xiàn)與微生物相關(guān)的不合規(guī)范的數(shù)據(jù)，均屬于微生物數(shù)據(jù)偏差 (Microbiological Data Deviation, MDD)。對實(shí)驗(yàn)室偏差數(shù)據(jù)的調(diào)查，有利 于持續(xù)提高實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的可靠性。

文件

        文件應(yīng)當(dāng)充分表明試驗(yàn)是在實(shí)驗(yàn)室里按可控的程序進(jìn)行的，一般包 括以下方面:人員培訓(xùn)與資格確認(rèn);設(shè)備驗(yàn)收、驗(yàn)證、檢定(或校準(zhǔn)期間核查) 和維修;設(shè)備使用中的運(yùn)行狀態(tài)(設(shè)備的關(guān)鍵參數(shù));培養(yǎng)基制備、貯藏和質(zhì)量 控制;菌種管理;檢驗(yàn)規(guī)程中的關(guān)鍵步驟;數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果計(jì)算的確認(rèn);質(zhì)量 責(zé)任人對試驗(yàn)報(bào)告的評估;數(shù)據(jù)偏離的調(diào)查。

        所有程序和支持文件，應(yīng)保持現(xiàn)行有效并易于人員取閱。涉及生物安全的操 作現(xiàn)場應(yīng)防止文件被污染。